判斷原代細胞是否污染?需結(jié)合肉眼觀察、顯微鏡檢查與專項檢測,培養(yǎng)基渾濁、顏色變黃、鏡下可見快速運動的微小顆?;蚪z狀菌絲是主要判斷依據(jù)。
一、肉眼觀察(初步判斷)
在換液或傳代前,首先觀察培養(yǎng)基狀態(tài):
渾濁度:正常培養(yǎng)基清澈透明,若出現(xiàn)霧狀或乳白色渾濁,提示可能為細菌污染。
顏色變化:培養(yǎng)基由粉紅/紅色變?yōu)辄S色,說明pH下降,常見于細菌代謝產(chǎn)酸;少數(shù)真菌污染可能導致變紫。
沉淀或漂浮物:出現(xiàn)白色、黃色顆粒沉淀(細菌聚集)或?棉絮狀、絲狀漂浮物?(真菌菌絲),可直接判定污染。

二、顯微鏡觀察(精準確認)
在100–200倍倒置顯微鏡下觀察細胞間隙和形態(tài):
細菌污染:視野中可見大量微小桿狀或球狀顆粒,并在細胞間隙快速運動,細胞逐漸變圓、脫落。
真菌污染:可見絲狀菌絲、圓形孢子或棉絮狀菌落,菌絲常纏繞細胞,導致增殖停滯。
支原體污染:普通光學顯微鏡難以直接觀察(體積僅0.1–0.3μm),但可間接發(fā)現(xiàn)細胞?空泡增多、增殖緩慢、貼壁差?等異常狀態(tài)。
注意:支原體污染隱蔽性強,若細胞長期生長不良但無明顯微生物跡象,建議使用?PCR或熒光染色法進行專項檢測。